色譜作為一種分析與分離技術(shù)，已有近百年歷史。近半個世紀以來，色譜技術(shù)發(fā)展迅速，無論是理論，還是各種分離模式，都趨向成熟，已作為分析化學(xué)的一個重要分支。色譜技術(shù)為醫(yī)藥、衛(wèi)生、生化、環(huán)保等學(xué)科的發(fā)展做出了極大的貢獻，同時在基因工程、生物工程及材料科學(xué)等方面也有著廣闊的應(yīng)用前景。作為這些學(xué)科必不可少的工具和手段，色譜技術(shù)越發(fā)顯示出其重要性。最近的統(tǒng)計資料顯示，全世界各類分析儀器中，氣相色譜儀和液相色譜儀的銷售額占了25%-30%。我公司目前推出了GC5400氣相色譜儀和LC-3100型液相色譜儀兩款儀器。以下將對色譜和色譜儀作相關(guān)介紹：

一、    色譜法的定義及分類

色譜法或色譜分析也稱之為層析法（chromatograhhy），是一種物理或物理化學(xué)的分離分析方法。它利用混合物中各組分在兩相間分配系數(shù)的差別，當溶質(zhì)在兩相間作相對移動時，各物質(zhì)在兩相間進行多次分配，從而使各組分得到分離。可完成這種分離的儀器即色譜儀。分配系數(shù)大的組分遷移速度慢，反之遷移速度快而被分離。

色譜法從不同的角度，有不同的分類方法，通?？砂淳奂癄顟B(tài)、操作方法及分離原理等進行分類。

（一）按流動相與固定相的狀態(tài)分類

1、按流動相的狀態(tài)分類   在色譜中流動相可以是氣體、液體或超臨界流體，相應(yīng)分為氣相色譜（GC）、液相色譜（LC）和超臨界流體色譜（SFC）。

2、按固定相的狀態(tài)分類   固定相可以是固體或液體。因此，氣相色譜法又可分為氣-固色譜法（GSC）與氣-液色譜法（GLC）。液相色譜又可分為液-固色譜法（LSC）和液-液色譜法（LLC）等。

（二）按操作形式分類

 按操作形式可分為柱色譜法、平面色譜法及逆流分配等類別。

（三）按色譜過程的分離機制分類

 按色譜過程的分離機制可分為吸附色譜法、分配色譜法、體積排阻色譜法、離子交換色譜法、親和色譜法、化學(xué)鍵合相色譜法、毛細管電色譜法和毛細管電泳法等。

（四）按使用領(lǐng)域不同分類

按使用領(lǐng)域?qū)ιV儀分類可分為分析型色譜儀和制備型色譜儀。

二、    色譜法的優(yōu)點

色譜法以其高超的分離能力為特點，它的分離效能遠遠高于其他分離技術(shù)如蒸餾、萃取、離心等方法。其主要優(yōu)點：

（一）分離效能高  如毛細管氣相色譜柱理論塔片數(shù)可達7萬-12萬。而毛細管電泳儀一般有幾十萬理論塔板數(shù)，至于凝膠毛細管電泳柱可達上千萬理論塔板數(shù)的柱效。

（二）應(yīng)用范圍廣  它幾乎可用于所有化合物的分離和測定，無論是有機物、無機物、低分子或高分子化合物，甚至有生物活性的生物大分子也可以進行分離和測定。

（三）分析速度快  一般在幾分鐘到幾十分鐘就可完成一次復(fù)雜樣品的分離和分析。

（四）樣品用量少  用極少的樣品就可完成一次分離和測定。

（五）靈敏度高  如氣相色譜可以分析幾納克的樣品，火焰離子化檢測器（FID）可達10^-12g/s，電子捕獲檢測器（ECD）達10^-13g/s，檢測限為10^-9g/L和10^-12g/L。

（六）分離和測定一次完成  可以和多種波譜分析儀器聯(lián)用。

（七）易于自動化  分離和分析自動完成，可以在工業(yè)流程中應(yīng)用。

三、    色譜儀的特點

（一）氣相色譜儀 

我公司目前生產(chǎn)的GC5400型氣相色譜儀系微機化、高性能、低價格、設(shè)計的通用型氣相色譜儀，具有高穩(wěn)定、結(jié)構(gòu)簡潔合理、操作方便、外型美觀等優(yōu)點。該儀器應(yīng)用范圍廣，適用于環(huán)境保護、大氣、水源等污染的痕量檢測；毒物的分析、監(jiān)測、研究；生物化學(xué)；臨床應(yīng)用；病理和病毒研究；食品發(fā)酵；石油化工；石油加工；油品分析；地質(zhì)、探礦研究；有機化學(xué)；合成研究；衛(wèi)生檢疫；公害檢測分析和研究等。它具有如下的特點：

（1）的微機系統(tǒng)，的控制功能

性能的微機溫度控制系統(tǒng)，采用了國際的控制技術(shù)，控溫精度高（優(yōu)于±0.05℃）、性高、抗干擾能力強；具有5個獨立的控溫區(qū)，控制溫度達400℃；極限溫度設(shè)定及過溫保護功能，確保儀器的安全運行。

全中文鍵盤設(shè)定各種控制和使用參數(shù)（包括檢測器操作參數(shù)），邏輯性強，容易操作；機內(nèi)具有自診斷、斷電保護、10種方法文件存儲及調(diào)用、2個外部事件控制、溫控定時啟動和關(guān)閉，時間程序、檢測器設(shè)定、量程，極性和電流設(shè)置與顯示等功能，可顯示各路溫控設(shè)定值、實際值、保留和分析時間等。

（2）靈活的進樣系統(tǒng)，滿足各種分析要求

儀器可同時安裝多達三個進樣器，根據(jù)分析要求，儀器可選擇進樣器組合，且各單元可獨立控溫，進樣器拆裝簡單。（3）單填充柱/雙填充柱進樣器：

可實現(xiàn)填充柱柱頭進樣方式，適用多種色譜柱；增加6通閥進行氣體進樣分析；在填充柱進樣器中使用連接件，可簡便地完成0.53寬口徑毛細管柱分析。（4）提供2種毛細管柱進樣系統(tǒng)，均適用于各種規(guī)格的毛細管柱：

a)      專用毛細管柱進樣器，具有隔膜吹掃和背壓閥分流調(diào)節(jié)。

b)      專用毛細管柱分流/不分流進樣器，獨立載氣流路和尾吹氣流路，具有隔膜吹掃和背壓閥分流調(diào)節(jié)，進口清洗電磁閥，通過編制時間程序來實現(xiàn)毛細管柱分流/不分流進樣。

（5）高靈敏度、高穩(wěn)定性檢測器

儀器可同時安裝多達三個檢測器，如FID、TCD、ECD檢測器等。根據(jù)不同的分析應(yīng)用采用不同的組合，能方便的實現(xiàn)檢測器的串聯(lián)和并聯(lián)工作。

新型的FID具有更低的檢測限，可方便地進行噴口和離子收集極的拆卸、清洗，精確固定的發(fā)射極安裝結(jié)構(gòu)確保每臺儀器性能的高度一致。

高靈敏度TCD采用高阻值錸鎢絲，可選配多倍電子放大電路板，靈敏度可達10000mV·mL/mg，獨特的空氣隔熱保溫結(jié)構(gòu)使TCD具有更高的穩(wěn)定性。

調(diào)制脈沖式ECD恒流源，靈敏度、電流選擇微機化。

（6）高精度雙重穩(wěn)定氣路

載氣流路采用穩(wěn)壓閥及穩(wěn)流閥雙重穩(wěn)定設(shè)計；空氣和氫氣流路采用穩(wěn)壓閥加針形閥的穩(wěn)定調(diào)節(jié)模式，穩(wěn)流閥和針形閥均采用數(shù)字刻度式旋鈕，具有高精度、重復(fù)性好、性高且流量調(diào)節(jié)方便直觀。

（7）高性能大容量柱箱

大容量柱箱可方便安裝且能同時容納毛細管柱和雙填充柱；柱箱具有快速加熱和快速降溫即自動后開門機構(gòu)，且可實現(xiàn)準室溫控制，柱箱程序升溫5階6平臺。

（8）多樣免費附件，安裝無憂

儀器提供初次安裝使用的全套附件，如凈化器、外氣路管、扳手工具、注射針和各類接頭，用戶僅須準備氣源即可。以上附件也無須另外付費。

（9）豐富的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，讓您自由選擇內(nèi)置式的數(shù)據(jù)采集板，使用工作站軟件在電腦上進行基流監(jiān)視、單柱補償、色譜數(shù)據(jù)處理；

a 采用獨立的雙通道外置式數(shù)據(jù)采集盒和智能化軟件組成的色譜工作站，無論是浮置信號或?qū)Φ匦盘柧赏瑫r快速采集和精確色譜數(shù)據(jù)處理；

b RS232通訊板及軟件，和工作站相連實現(xiàn)與主機進行雙向通訊和反控，即在一臺電腦上完成溫度、檢測器參數(shù)設(shè)置和監(jiān)視，以及數(shù)據(jù)處理參數(shù)的設(shè)定；

c 獨特的色譜仿真軟件，在電腦上模擬尋找色譜操作條件，提供色譜仿真教學(xué)和培訓(xùn)、色譜知識庫等。

以上是我公司目前生產(chǎn)的GC5400型氣相色譜儀外觀圖，它由氣路系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、柱系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理和控制系統(tǒng)組成。

進樣系統(tǒng)：分為填充柱進樣和毛細管進樣、毛細管分流不分流進樣。

檢測系統(tǒng)：目前市場上應(yīng)用最廣的是氫火焰離子化檢測器（FID）和熱導(dǎo)檢測器（TCD）、質(zhì)譜檢測器（MS）。

主要技術(shù)指標：

溫度控制：控溫范圍：室溫上7℃到400 ℃（增量1℃）控溫對象：柱箱、檢測器、熱導(dǎo)池、進樣器、輔助程升階數(shù)：五階程升速率：0.1℃~40℃/min (增量0.1℃)恒溫時間：0~655min (增量1min)

氫火焰離子化檢測器(FID) 敏感度：M≤1×10^-11g/s (C₁₆)測試結(jié)果：M≤8×10^-12g/s (C₁₆)噪  聲：≤5×10^-14A漂  移：≤6×10^-13A/h線性范圍：≥10⁶

熱導(dǎo)池檢測器(TCD)靈敏度：≥2500Mv/mL/mg (C₁₆)噪  聲：≤20μV漂  移：≤30μV/h靈敏度：≥5000mV/mL/mg（電子放大）線性范圍：≥10⁴

（二）液相色譜儀

    我公司目前生產(chǎn)的LC3100型智能全控液相色譜儀可以由LC-3100 高壓恒流泵與LC-UV100紫外檢測器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)，也可使用LC-WS100工作站同時控制數(shù)臺LC-3100 高壓恒流泵、LC-UV100紫外檢測器及恒溫柱箱等，實行多元高壓梯度洗脫、波長掃描等功能。

　　LC-3100智能全控液相色譜系統(tǒng)操作既直觀又方便。它可以在不聯(lián)計算機時通過儀器本身的小鍵盤輸入所有控制信息，所有操作都在液晶屏上顯示出。也可連接計算機，使用工作站軟件。該工作站與色譜儀之間沒有2次模數(shù)轉(zhuǎn)換，采用純數(shù)字通訊，且讀入的均為直接二通道采樣數(shù)據(jù)，不經(jīng)過任何處理，不存在信號畸變，這樣了采樣精度和后處理時不丟失數(shù)據(jù)。采樣精度達18位（0.1秒/次＊2通道）。

    LC-WS100工作站分為實時采樣、后處理、波長回放、圖譜比較四個獨立的單元。其中實時采樣單元可以直接監(jiān)控多達4臺泵及紫外檢測器?？梢匀我飧淖儾ㄩL、泵的流量、氘燈開關(guān)，可以在任意時刻停泵或者切換轉(zhuǎn)向閥，讓組分保留在流通池里，然后自動啟動波長掃描，可以得到該組分對不同波長的連續(xù)譜圖。還可以連接一個轉(zhuǎn)換閥，通過事件設(shè)置控制轉(zhuǎn)換閥，從而達到分離回收流動相。這些都是其它工作站所不能做到的。另外，所有顯示數(shù)據(jù)都已經(jīng)轉(zhuǎn)換成AU值，無須用戶進行煩瑣的折換。

由于軟件是在WINDOWS系統(tǒng)下運行，所有功能菜單化，不需要學(xué)習(xí)，一看就會，操作簡便。

圖為LC-3100型液相色譜儀的外觀圖

儀器特點：

標配P100高壓恒流泵UV100紫外檢測器7725i手動進樣閥Exformma Pronaos系列色譜柱Ws100工作站軟件。數(shù)字化電腦智能全控液相色譜系統(tǒng)。往復(fù)式雙柱塞并聯(lián)泵：更加穩(wěn)定，使用壽命更長。外型新穎，操作方便，體現(xiàn)人性化。各項性能指標，媲美國外流行機種。光路系統(tǒng)采用精密定位結(jié)構(gòu)和熱隔離安裝技術(shù)，具有精度高，偏移小和穩(wěn)定時間短的特點。零部件均采用世界的數(shù)控加工中心制造。

技術(shù)指標：

高壓恒流泵基本技術(shù)指標：流量范圍：0.001～9.999 mL/min流量穩(wěn)定性誤差：Sr≤0.3% ， RSD<0.06%流量設(shè)定值誤差：Ss≤2%壓力線性和度：顯示壓力誤差≤±0.5MPa(0～42MPa)壓力脈動：≤0.1 Mpa泵的密封性壓力：42MPa工作壓力：42MPa(0.001～9.999mL/min)外型尺寸：450mm×300mm×160mm(長×寬×高)

紫外檢測器基本技術(shù)指標:波長范圍：190～680nm光譜帶寬：8nm波長示值誤差：≤±1nm波長重復(fù)性優(yōu)于0.1nm基線噪音：≤2×10^-5AU（動態(tài)）基線漂移：≤2×10^-4AU（動態(tài)）最小檢測量：1×10^-8g/mL(萘的甲醇溶液)外形尺寸：450mm×300mm×160mm(長×寬×高)

四、    GC5400氣相色譜儀在生物制藥行業(yè)的應(yīng)用及舉例

（一）GC5400型氣相色譜儀的應(yīng)用

氣相色譜作為分離技術(shù)與方法已有近50年歷史。它是分析化學(xué)的重要組成部分。雖然它所能分離分析的物質(zhì)只占全部有機物的20％左右，但這部分化合物卻與我們的日常生活密切相關(guān)，特別是環(huán)境中的有毒有機物，這些有毒有機物中的絕大部分都是揮發(fā)性和半揮發(fā)性的。可以毫不夸張地講，在一切需要對揮發(fā)性和半揮發(fā)性混合物進行分離分析的領(lǐng)域，如石油化工、有機合成、輕工食品、天然產(chǎn)物、衛(wèi)生防疫和法醫(yī)質(zhì)檢等，都需要氣相色譜儀。在環(huán)境保護、食品安全及應(yīng)對突發(fā)事故等方面，氣相色譜更是扮演了重要角色。.

氣相色譜儀在生物制藥行業(yè)中的應(yīng)用主要包括藥物含量測定,雜質(zhì)檢查和有機溶劑的殘留量、中藥成份研究、藥劑分析、治療藥物監(jiān)測和要去代謝研究。如：測定桉油中桉油精、丁香中的丁香酚、肉桂油中的桂皮醛等等。

（二）GC5400型氣相色譜儀的應(yīng)用實例

1、丁香酚的含量測定（外標法）

（1）    樣品

    復(fù)方南星止痛膏由生天南星、生川烏、丁香、肉桂、川芎等組成。具有散寒除濕、活血止痛之效，主要用于骨性關(guān)節(jié)炎屬寒濕淤阻證。

（2）    色譜條件

色譜柱為聚乙二醇，J&WDBWAX毛細管柱（0.53nm）。柱溫145℃，氣化室溫度220℃。氣體流速氮氣和氫氣均為50ml/min。檢測器為FID，輸入高阻為10⁹，輸出衰減為16.記錄器量程20mv，紙速4mm/min。

（3）    校正因子的測定

   精密稱取丁香酚對照品適量，加醋酸乙酯溶解并稀釋至每ml含3mg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。取1ul注入氣相色譜儀，連續(xù)進樣3-5次，計算各鋒面積，按平均鋒面積計算校正因子：

                f_i=W_s/A_s

經(jīng)測定，丁香酚的校正因子平均值為1.01，RSD=1.07%

（4）    供試品溶液的配置和測定

  取本品8片，除去蓋襯，刮下藥膏，精密稱定，置500ml燒瓶中，加水約250ml，連接揮發(fā)油測定器，自測定器上端加水充滿刻度部分，并溢入燒瓶為止，再加醋酸乙酯3ml，連接回流冷凝管，繼續(xù)加熱至沸，并保持微沸4小時，將揮發(fā)油測定器中的液體移至分液漏斗中，分取醋酸乙酯層，水層用醋酸乙酯提取一次，再用醋酸乙酯多次洗滌揮發(fā)油測定器和分液漏斗，合并上述醋酸乙酯液，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取1ul注入氣相色譜儀，測定，計算，即得。

    此法回收率為98.1%，RSD為0.75%。本品含丁香酚應(yīng)不低于0.30%。

2、丹皮酚的含量測定（內(nèi)標法）

（1）    樣品

 麥味地黃丸及其他含牡丹皮的中成藥

（2）    氣相色譜條件

    氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器。色譜柱為2m玻璃柱，內(nèi)填5%SE-30%Cromosorb W 80-100 目，也可以用OV-70。柱溫180℃，檢測器及進樣器溫度為220℃。載氣氮氣，60ml/min；氫氣，50 ml/min；空氣，500 ml/min，量程10²，衰減4。

（3）    標準曲線的繪制

精密稱取丹皮酚對照品適量，加溶解制成每1ml含1mg的溶液，作為標準溶液。另取十八烷加丙酮制成每1ml含2mg的溶液，作內(nèi)標溶液。

取標準溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml分別置5個10ml容量瓶中，每瓶各加內(nèi)標溶液1ml，用稀釋至刻度，搖勻（每1ml含丹皮酚分別為40、80、120、160、200ug）。取1ul進樣，以丹皮酚峰面積與內(nèi)標物峰面積之比為縱坐標，丹皮酚絕對量（ug）為橫坐標，作圖，得回歸方程為Y=0.26X-0.12，r =0.9998

（4）    樣品測定

取麥味地黃丸1g剪碎，精密稱定，置10ml容量瓶中，加-丙酮（2：1）9ml在室溫下浸泡1小時，超聲波振蕩提取20分鐘，加內(nèi)標液1ml搖勻。靜置，待澄清后，取上清液1ul進樣測定并計算結(jié)果。

五、    LC-3100型液相色譜儀在生物制藥行業(yè)的應(yīng)用及實例

（一）LC-3100型液相色譜儀在生物制藥行業(yè)的應(yīng)用

液相色譜法（HPLC）是20世紀60年代末70年代初發(fā)展起來的一種新型分離分析技術(shù)，隨著不斷改進與發(fā)展，目前已成為應(yīng)用極為廣泛的化學(xué)分離分析的重要手段。它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、固定相和高靈敏度檢測器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動化的特點。為了更好地了解液相色譜法性，現(xiàn)從兩方面進行比較：

液相色譜法比起經(jīng)典液相色譜法的最大優(yōu)點在于高速、、高靈敏度、高自動化。高速是指在分析速度上比經(jīng)典液相色譜法快數(shù)百倍。由于經(jīng)典色譜是重力加料，流出速度極慢；而液相色譜配備了高壓輸液設(shè)備，流速可達 103cm·min-1.例如分離苯的羥基化合物，7個組分只需1min就可完成。對氨基酸分離，用經(jīng)典色譜法，柱長約170cm，柱徑0.9cm，流動相速度為30cm3·h-1，需用20多小時才能分離出20種氨基酸；而用液相色譜法，只需lh之內(nèi)即可完成。又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，采用梯度洗脫，可在不到0.5h內(nèi)分離出尿中104個組分。

    液相色譜法主要用于復(fù)雜成分混合物的分離、定性、與定量，其定性與定量方法與氣相色譜相同。液相色譜法廣泛用于微量有機藥物及中草藥成分的分離、鑒定和含量測定。近年來，對體液中原形藥物及其代謝產(chǎn)物的分離分析，無論在靈敏度、專屬性及快速性等方面都有獨特的優(yōu)點，已成為體內(nèi)藥物分析，藥物研究及臨床檢驗的重要手段。

（二）LC-3100型液相色譜儀在生物制藥行業(yè)的應(yīng)用實例

（1）當歸芍藥散的質(zhì)量研究：

當歸芍藥散含有：當歸、川芎、白芍、茯苓、白術(shù)、澤瀉等；其中芍藥中含有的芍藥苷，當歸、川芎中所含有的阿魏酸，為本方的主要化學(xué)成分，其定性和定量分析可以評價該方的內(nèi)在質(zhì)量。

1          材料

當歸芍藥散濃縮細粒

2        標準品及標準溶液

標準品：芍藥苷、阿魏酸

標準溶液：精密稱取10mg芍藥苷置于100ml之容量瓶中加入純水使溶解并定容，該溶液過0.45um濾膜，濾液即為標準溶液。精密稱取阿魏酸對照品1mg，置于50ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用0.45um濾膜過濾，濾液即為標準品溶液。

3          樣品制備及測定

精密稱取當歸芍藥散濃縮細粒1.0g，置于100ml容量瓶中，加80ml50%甲醇，超聲振蕩提取30分鐘，放冷，加入50%甲醇至100ml，離心10分鐘，取上清液，以0.45um濾膜濾過，濾液即為樣品溶液。樣品溶液及標準品溶液各1ul進樣，按所設(shè)置條件分離測定，以外標法計算其含量。

（2）液相色譜法測定苦參堿含量

采用液相色譜法測定苦參堿原料藥的含量,用氨基硅烷鍵合硅膠柱(416 mm ×250mm ,5μm) ,以乙腈:無水乙醇:1 %磷酸水溶液(80 :8 :12) 為流動相,用紫外檢測器于220nm 波長處檢測。結(jié)果,線性范圍為44164～22312mg/ L ( r =

019998) ,檢測限為10ng。提示本法操作簡便,分析快速,干擾小。

苦參堿(matrine) 是從苦豆子中提取的一種生物堿, 其藥理作用在臨床表現(xiàn)顯著,具有抗病原微生物、抗腫瘤、抗炎癥、抗過敏、平喘等作用。近年來以苦參堿為原料的各種單方或復(fù)方制劑如注射液、栓劑、軟膏、氣霧劑等也在治療乙肝、婦科炎癥、皮膚病及平喘等方面取得了良好效果?？鄥A國家藥品標準中的含量測定方法采用酸堿滴定法,但其鑒別及有關(guān)物質(zhì)的檢查采用了液相色譜法進行檢測。而探索用液相色譜法測定苦參堿原料藥的含量,在氨基柱上對樣品進行了測定,方法簡便,結(jié)果,并且可以與鑒別及有關(guān)物質(zhì)的檢查一起進行,便于對苦參堿進行質(zhì)量控制。

1 　儀器與試藥

液相色譜儀(包括高壓泵、手動進樣器、紫外檢測器、色譜工作站等) ,紫外(可見) 分光光度計。

苦參堿對照品(中國藥品生物制品檢定所) ,苦參堿原料

乙腈、無水乙醇均為色譜純,磷酸為分析純,試劑用水為超純水。

2 　方法與結(jié)果

色譜條件　色譜柱為安捷倫公司的ZORBAX NH2 柱

(416mm×250mm ,5μm) ,流動相為乙腈:無水乙醇:磷酸水溶

液(1 % ,v/ v) (80 :8 :12) ,流速110 ml/ min ,檢測波長220nm ,

進樣量20μl ,柱溫為室溫。

a  線性關(guān)系　精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的苦參堿對照品約50mg ,置50ml容量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品儲備液。精密量取該溶液110、210、310、410、510ml ,分別置25ml容量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻。按上述色譜條件測定,以濃度(mg/ ml) 為橫坐標,峰面積為縱坐標進行線性回歸,求得回歸方程為: Y= - 2218947 + 1084515443 X , r = 019998

結(jié)果表明:苦參堿濃度在44164～22312 mg/ L 的范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

b 精密度試驗　取a）項下濃度為0.108 mg/ ml 的對照品溶液,重復(fù)進樣6 次,峰面積的相對標準偏差(RSD) 為0.11 %( n = 6) 。

c 檢出量　對照品溶液經(jīng)用流動相稀釋,當S/ N ≥3 時,苦參堿的檢出濃度為0.15μg/ ml ,檢出量為10ng。

d 穩(wěn)定性試驗　取a）項下濃度為0.108 mg/ ml 的對照品溶液,分別在第0、2、4、6、8、24 h 進樣測定,峰面積的相對標準偏差(RSD) 為0.11 %( n = 6) ,表明該溶液在24h 內(nèi)穩(wěn)定,且進樣重現(xiàn)性良好。

e  重復(fù)性試驗　取“f”項下的供試品溶液,重復(fù)進樣6次,峰面積的相對標準偏差(RSD) 為0.11 %( n = 6) 。

f  樣品測定　精密稱取樣品適量,加流動相溶解并稀釋制成濃度為0.108 mg/ ml 的供試品溶液;另精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的苦參堿對照品適量,加流動相溶解并稀釋制成濃度為0.108 mg/ ml 的對照品溶液,照上述色譜條件測定,按外標法以峰面積計算含量,測得3 批樣品含量分別為100.11 %、99.19 %、99.19 % ,相對標準偏差(RSD) 分別為0.16 %、0.14 %、1.12 %( n = 3) ,與按酸堿滴定法測得的結(jié)果(99.16 %、99.16 %、99.14 %) 基本一致。

3、討論

本法采用液相色譜法測定苦參堿含量,具有簡便、快速、靈敏、的特點,并排除了其他生物堿的干擾,適用于對苦參堿進行含量測定。

本法的測定條件也可用于對苦參堿的鑒別和有關(guān)物質(zhì)的檢查,以便于生產(chǎn)及科研中同時對苦參堿進行鑒別、有關(guān)物質(zhì)檢查及含量測定的質(zhì)量控制。