產(chǎn)品簡介
品牌:源昇肽
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
有效成分含量:98%
檢測方法:酶聯(lián)免疫法
保存條件:2-8℃
產(chǎn)品保質(zhì)期:六個月
供 貨 期:現(xiàn)貨供應(yīng)
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿等
用途范圍:僅供科研使用,不得用于醫(yī)學(xué)診斷,使用仔細閱讀說明書
常用方法及原理
夾心法
夾心法常用于檢測大分子抗原,一般的操作步為:
a.將具有一性的抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
b.加入待測檢體,檢體中若含有待測的抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗體進行一性鍵結(jié)
c.洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原一的一次抗體,與待測抗原進行鍵結(jié)
d.洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結(jié)
e.洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果原理:針對抗原分子上2個不同抗原決定能的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結(jié)合物
間接法
間接法常用于檢測抗體,一般的操作步驟為:
a.將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原。
b.加入待測檢體,檢體中若含有待測的一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進行一性鍵結(jié)。
c.洗去多余待測檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測的一次抗體鍵結(jié)。
d.洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELSAreader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。
原理:利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體。
競爭法
競爭法一般用于檢測小分子抗原,其操作步驟為:
a.將具有一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
b.加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行一性鍵結(jié)
c.加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競爭法之由來。
d.洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。
e.當需要俠測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA.
樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8℃,使用室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3.濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用充分搖勻。
免責(zé)聲明
1.試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負責(zé)。
嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。
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